开发一种用于分离E.albertii的新型改良选择性培养基 CT-PS-XR-MacConkey琼脂及其在食品样品中的评估
2025-05-16 10:06:46
由于E.albertii的生化和遗传特性与E. coli非常相似,其毒力基因谱与非典型肠致病性大肠杆菌(aEPEC)、肠出血性大肠杆菌(EHEC)、细胞致死性膨胀毒素II基因阳性大肠杆菌(CTEC-II)和鲍氏志贺氏菌血清型13的毒力基因谱相同,因此E.alberti经常被误认为aEPEC、EHEC、CTEC-II和S.boydii。本研究的宗旨是开发出一种新型的E.albertii选择性鉴别培养基,特异性分离E.albertii。
内容
1.摘要
已知头孢克肟和亚碲酸盐已知能抑制大多数肠杆菌属。有研究发现添加亚碲酸盐抑制了E.albertii在LB肉汤中的生长,但在TSB中没有。为了找到TSB中存在的积极因素,在胰蛋白胨、大豆蛋白胨,葡萄糖或缺的TSA平板上检测E.albertii的生长。发现磷酸盐、大豆蛋白胨和葡萄糖的缺乏确实降低了E.albertii的生长。然而,XRM-MacConkey琼脂中没有这些物质,因此不会影响E.albertii的生长。总之,已经开发出一种新型的E.albertii选择性鉴别培养基,即含有头孢克肟(C)、亚碲酸盐(T)、磷酸盐(P)和大豆蛋白胨(S)的XRM MacConkey琼脂培养基(称为CT-PS-XR-MacConkey琼脂培养基),通过菌落颜色将E.alberti(无色)与E.coli(红色)区分开来。
2.结果与讨论
2.1头孢克肟和亚碲酸盐对E.coli和E.alberti生长的影响
如图1所示,在头孢克肟的存在下,两株E.coli和三株E.alberti能够在LB肉汤和TSB中生长。然而,在亚碲酸钾的存在下,在LB肉汤中培养时,不仅E.albertii的生长受到抑制,E.coli的生长也受到抑制。有趣的是,E.coli在亚碲酸钾存在的TSB中培养时无法生长,但E.albertii可以在TSB中生长。当它们在头孢克肟和亚碲酸钾同时存在下的LB肉汤和TSB中培养时,也得到了类似的结果。这些数据可能表明,TSB中有一些积极因素,而这些因素在LB中不存在,有助于E.albertii在亚碲酸钾的胁迫下生长。
表1评估了三株E.albertiis和两株E.coli在TSA和XRM MacConkey上在存在或不存在头孢克克肟和亚碲酸钠的情况下的生长情况。实验数据表明TSA含有一些未知因素,即使在头孢克肟和亚碲酸钾存在的情况下,也能促进E.albertii的生长,而XRM MacConkey琼脂可能含有一些抑制E.alberti生长的抑制因素。
2.2 TSA 中促进 E. albertii 生长的积极因素筛选
与完整TSA相比,评估了三种E.albertii在四种TSA缺陷培养基上的生长情况(图2)。数据表明,在亚碲酸钾存在的情况下,磷酸氢二钾、葡萄糖和大豆蛋白胨可能对E.albertii在TSA上的生长很重要,但胰蛋白胨可能会抑制E.alberti的生长。
在含有亚碲酸钾和上述化合物的XRM MacConkey琼脂上培养E.coli和E.albertii,证实了磷酸氢二钾、葡萄糖和大豆蛋白胨对E.albertiis生长的重要性(表2)。
综上所述,在单独或同时存在头孢克肟和亚碲酸钾的情况下,大豆蛋白胨和磷酸氢二钾的存在对于E.albertii在XRM MacConkey琼脂上的生长和特异性分离非常重要,这可以抑制大肠杆菌和其他细菌的生长。
2.3选择性分离培养基的评估
依据上述结果开发了一种改良的XRM MacConfey琼脂,改良培养基含有50μg/L头孢克肟、2.5mg/L亚碲酸钾、2.5g/L磷酸氢二钾和10.0g/L大豆蛋白胨,以及XRM MacConkey琼脂的成分,并评估了培养基的敏感性(表3)。有趣的是,鼠伤寒沙门氏菌在XR MacConkey琼脂上形成无色菌落,但在XRM MacConkey琼脂上形成红色菌落,且在CT-PS-XR-MacConkey琼脂上不能生长,表明蜜二糖(M)可以从培养基中去除。因此,CT-PS-XR-MacConkey琼脂被开发为E.alberti的选择性分离培养基。